1854—1858年，新教来华传教士在太平天国运动和“百万《圣经》送中国”的活动中相时而动，推出了首部官话汉译《圣经》——“南京官话译本”。本文结合澳大利亚国立图书馆藏1854年南京官话《马太传福音书》、1856年南京官话《新约全书》、新南威尔士州立图书馆藏1857年南京官话《新约全书》、德国柏林国家图书馆藏1857年南京官话《新约全书》、大英圣书公会年报、伦敦会档案、麦都思个人著作等资料，考述“南京官话译本”的成书背景、翻译谱系、文本特征，探讨其对后世译本和基督教在地化的影响，分析其在《圣经》汉译史、近代中西交流史上的地位与作用。